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Renilla 萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光高亮型)

CBPH0013

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Renilla 萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光高亮型)

本产品是一种具有超高灵敏度、稳定、均质的海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒,本产品无需洗涤或收集细胞即可通过化学发光法直接测定细胞内海肾萤光素酶(sea pansy (Renilla reniformis) luciferase ,简称 Renilla luciferase)活性。在细胞培养板内加入与培养液等体积的检测试剂反应5分钟,即可进行化学发光检测。 本试剂盒使用灵活便捷、检测灵敏度高、测定样品的线性范围宽,性能优于国内主要同类产品。另外,本产品也可以用于裂解并收集保存的细胞样品的检测。

本试剂盒为即配即用型试剂,集细胞裂解、海肾萤光素酶检测于一体,通过“加入-混合-检测” 免去了先裂解后检测的实验步骤,而且稳定的“辉光”更适合高通量样品的检测。

 


Figure 1.  反应原理

产品组分

货号

CBPH0013-1

CBPH0013-2

CBPH0013-3

规格

100 T

1000 T

10000 T

萤光素酶报告基因细胞裂解液(5×)

1 bottle
10 mL/bottle

1 bottle
30 mL/bottle

10×CBPH0013-2

Renilla 萤光素酶 plus检测缓冲液

10 mL

100 mL

10×CBPH0013-2

Renilla 萤光素酶 plus 检测底物(100×)

100 μL

1 mL

10×CBPH0013-2

 

Protocol  

1.检测试剂的准备 
① Renilla 萤光素酶 plus 检测底物(100×) , 每次开盖前需进行短暂低速离心。

②Renilla 萤光素酶 plus 检测工作液配制:根据实际使用量,以 100:1 的比例将适量的 Renilla 萤光素酶 plus 检测缓冲液与 Renilla 萤光素酶 plus 检测底物(100×) 混匀,室温避光备用。例如,将1mL Renilla 萤光素酶 plus 检测底物加入 100mL Renilla 萤光素酶 plus 检测缓冲液并充分混匀,即可制得 101mL Renilla 萤光素酶 plus检测工作液。
注:建议现配现用,剩余的工作液当次实验结束后,直接舍弃,不要留存。 
 
2.操作方法

(1)细胞检测

 ① 从细胞培养箱中取出细胞培养板,放置 5-15min ,恢复至室温。
 ② Renilla Luciferase 反应检测

使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的 Renilla 萤光素酶 plus检测工作液,加样体积与初始细胞培养液体积相同并充分混匀。例如,96孔板建议加入100μL培养液,相应加入100μL检测工作液。孵育5min后于化学发光仪或多功能酶标仪中检测 Renilla Luciferase 报告基因活性。
 

(2)细胞裂解后的样品检测

·裂解细胞

a.贴壁细胞:吸去细胞培养基,用PBS缓慢轻柔地洗涤一次,洗去残留的培养基,然后将液体全部吸弃。悬浮细胞:离心去上清后,用PBS清洗细胞一次,再次离心收集细胞沉淀。
b. 配制1×细胞裂解工作液。每次使用前以1:4 比例将萤光素酶报告基因细胞裂解液(5×)与 ddH2O充分混合(例如将1mL 萤光素酶报告基因细胞裂解液(5×)加入 4mL ddH2O充分混合),置于冰上备用。
c. 按照下表推荐加入适量的1×细胞裂解工作液,室温下静置或振动摇晃裂解15min ,吹打并吸取全部细胞裂解产物至1.5mL离心管中,12000g 离心 5-10min ,取上清用于后续检测。

Cell Culture Plate

6-well

12-well

24-well

48-well

96-well

1 ×Cell Lysis Buffer

500μL

200μL

100μL

50μL

20μL

注:若萤光素酶的表达水平过低,可适当减少细胞裂解液用量以提高蛋白浓度,但需保证裂解液体 积可以覆盖细胞孔板底面,否则会影响裂解效果。
 

·Renilla Luciferase 反应检测 
①小心吸取 20μL细胞裂解上清依次加入至检测管或酶标板中,再加入 100μL平衡至室温的含有底物的Renilla萤光素酶plus检测工作液。
②孵育5min后于化学发光仪或多功能酶标仪中检测Renilla Luciferase报告基因活性。
注:如果对于数据的稳定性要求不太高,可以在混匀后立即进行化学发光检测。
 

保存条件
未开封试剂盒-20℃保存,自生产之日起12个月有效 

 

注意事项
1. 检测仪器选择:能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测,但是针对相同的样品,不同检测器 本底信号值和测量值均可能不同;且对于同一样本检测,不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干 扰,推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
2. 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响,所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3. 酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
4. 如需同时检测多个细胞培养板,请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致,再进行数据读取,以此获得最佳的检测结果。
5. Renilla 萤光素酶 plus检测底物(100×)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况,此时用无水乙醇把体积补足至包装规格,混匀后即可使用。
6. 海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480 nm。

 
 
Product Information 

Intended Use

Research Use Only

Unit Size

100 T/1000 T/10000 T

Storage

-80℃~-20℃

 

 

 

Expiry

12 months from the date of manufacture

 

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